pUC-T TA載體是一種克隆PCR產(chǎn)物的載體,它是由pUC18載體在EcoR V 酶切位點處切開,在兩側(cè)的3′端添加T而成。由于大部分耐熱聚合酶反應(yīng)時都會在 PCR 產(chǎn)物的3′端添加一個A,它可以與pUC-T 3′端的T互補連接,因此可大大提高PCR產(chǎn)物的 連接和克隆效率。 試劑盒中配備率的T4 DNA Ligase和為快速DNA連接優(yōu)化的2×Quick Ligation Reaction Buffer。連接效率相當(dāng)于用T4 DNA Ligase 進(jìn)行常規(guī)連接1小時。帶有插入片 段的重組子可根據(jù)α互補原理,進(jìn)行藍(lán)白斑篩選,判斷載體中有無外源基因的插入。克 隆后可以用BcaBEST Sequencing Primers和 M13通用引物對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序。
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