在臨床實(shí)驗(yàn)室,對(duì)試劑準(zhǔn)備一般不太注意,通常的做法是,在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題,其直接的后果是對(duì)一些弱陽性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。因此在
ELISA測(cè)定中試劑的準(zhǔn)備關(guān)鍵的是,在實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以滿足測(cè)定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對(duì)所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外,當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí),則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時(shí)配制。
在現(xiàn)在的ELISA試劑盒商品試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點(diǎn)
生化測(cè)定的煩難主要在于下列幾個(gè)方面:查閱文獻(xiàn)選擇測(cè)定方法,配制試劑,預(yù)實(shí)驗(yàn)以判斷該方法是否適合自己的研究材料,反復(fù)調(diào)整以優(yōu)化測(cè)定體系和測(cè)定步驟。對(duì)于研究經(jīng)驗(yàn)和測(cè)定訓(xùn)練都不足的研究生而言,上述煩難常常會(huì)造成測(cè)定反復(fù)失敗,導(dǎo)致時(shí)間、樣品和試劑的大量浪費(fèi),不能及時(shí)獲得可靠的數(shù)據(jù)。